作业帮DNA与PCR凝脂糖电泳问题DNA经过PCR之后与母液DNA进行凝脂糖电泳,母液DNA有显色结果,但是PCR没有,排除PCR过程可能出错的原因之外,还有可能因为什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/27 16:05:14
DNA与PCR凝脂糖电泳问题DNA经过PCR之后与母液DNA进行凝脂糖电泳,母液DNA有显色结果,但是PCR没有,排除PCR过程可能出错的原因之外,还有可能因为什么?
DNA与PCR凝脂糖电泳问题
DNA经过PCR之后与母液DNA进行凝脂糖电泳,母液DNA有显色结果,但是PCR没有,排除PCR过程可能出错的原因之外,还有可能因为什么?
DNA与PCR凝脂糖电泳问题DNA经过PCR之后与母液DNA进行凝脂糖电泳,母液DNA有显色结果,但是PCR没有,排除PCR过程可能出错的原因之外,还有可能因为什么?
电泳成像体系：凝胶是否正常,是否添加EB（溴化乙啶）或EB是否降解了,上样时是否样品大量泄露,凝胶成像系统能否正常工作.
由于,你的母液DNA相当于正对照,该正对照有正常的显色结果,这表明电泳成像体系运转正常.
但是有两点需要确定,一是,你的PCR产物上样时添加的loading buffer的种类和浓度是否与正对照的一致；二是,你在上样PCR产物时,有没有把点样孔的底部戳破,致使上的样品全部渗出至凝胶之外了.
还有需要考虑的是：1.你的母液DNA确定了是DNA样品,不是没有清除干净的RNA.
因为,提取DNA时经常会提取出RNA样品,而且没有经过RNase处理的话,会残留非常多的RNA,如果你的DNA样品又是比较小的话,很容易弄混.
2.你的PCR目的产物是否比较小,而母液DNA片段比较大,你电泳时间偏长,导致小分子片段已经跑出了凝胶.
虽说,你排除了PCR过程可能会出错,我建议你还是重新合成一对引物再试试（因为,有时合成出来的引物,配成溶液后,即使在-20度冰箱保存,还是出现降解的现象,这种现象比较少见,但是出现过.）,另外,仔细核对下你的PCR反应液配置是否出错,PCR反应参数设定是否有问题
时间太长了 小分子的片段跑出去了 按你所描述的也只有这个可能了
一般是PCR没有产物，因为PCR体系中的DNA模板很少，跑电泳看不到，而母液有，则模板没问题，电泳没问题，只有PCR失败了。