用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/29 07:55:20
用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢?
用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗
怎么筛选这种呢?
用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢?
我理解楼主的问题是这个样子.在连接之后的筛选其实是分两步的.第一步是筛选出含有载体标记基因的连接产物,这样的产物可能有载体-目的基因连接和载体-载体连接,利用的一般是载体上的标记基因的抗性培养(一般的标记基因是抗四环素或者是抗氨苄青霉素基因,只要用四环素或者是氨苄青霉素的培养基就可以了).第二步是筛选出载体-目的基因,在上一步的培养基上挑菌,扩大培养之后,再接种的目的基因的培养基上,从而筛选出阳性克隆就可以了(这一步常用的、比较简单的方法就是蓝白板的筛选).所以即使有载体-载体的连接物,也是会被在第二步筛选掉得.
载体自连的概率其实不小,因为这是一个宏观统计的问题,况且一般的载体都要比目的基因大很多,楼主应该一想就会明白.所以在实验中一般采用的是用两种不同的内切酶处理切口,这样就限定了连接的顺序和方向,减少了无用的连接产物.
楼主如果还有疑问还可追问,小的尽量帮忙解答.O(∩_∩)O~
楼主加油!
是能生长 不过载体的自连概率小很多 而且长的菌还需要在做一次PCR验证的PCR验证是什么就是用菌液做模板 用扩增目的基因的引物做一次PCR 有条带就说明目的基因连进去了和分子杂交的显示带技术差不多么?PCR就是PCR。。。。没有PCR你怎么扩增出目的基因DNA的。。。。...
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是能生长 不过载体的自连概率小很多 而且长的菌还需要在做一次PCR验证的
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那是选择培养基,那种载体载体的都没了