用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/29 07:55:20

用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢?
用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗
怎么筛选这种呢?

用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢?
我理解楼主的问题是这个样子.在连接之后的筛选其实是分两步的.第一步是筛选出含有载体标记基因的连接产物,这样的产物可能有载体-目的基因连接和载体-载体连接,利用的一般是载体上的标记基因的抗性培养(一般的标记基因是抗四环素或者是抗氨苄青霉素基因,只要用四环素或者是氨苄青霉素的培养基就可以了).第二步是筛选出载体-目的基因,在上一步的培养基上挑菌,扩大培养之后,再接种的目的基因的培养基上,从而筛选出阳性克隆就可以了(这一步常用的、比较简单的方法就是蓝白板的筛选).所以即使有载体-载体的连接物,也是会被在第二步筛选掉得.
载体自连的概率其实不小,因为这是一个宏观统计的问题,况且一般的载体都要比目的基因大很多,楼主应该一想就会明白.所以在实验中一般采用的是用两种不同的内切酶处理切口,这样就限定了连接的顺序和方向,减少了无用的连接产物.
楼主如果还有疑问还可追问,小的尽量帮忙解答.O(∩_∩)O~
楼主加油!

是能生长 不过载体的自连概率小很多 而且长的菌还需要在做一次PCR验证的PCR验证是什么就是用菌液做模板 用扩增目的基因的引物做一次PCR 有条带就说明目的基因连进去了和分子杂交的显示带技术差不多么?PCR就是PCR。。。。没有PCR你怎么扩增出目的基因DNA的。。。。...

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是能生长 不过载体的自连概率小很多 而且长的菌还需要在做一次PCR验证的

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那是选择培养基,那种载体载体的都没了

用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢? 当使用限制酶来获取目的基因时是否一定要用同种限制酶切割DNA和质粒来获取目的基因 质粒和目的基因的问题(急)质粒被限制酶切了一个切口,而目的基因也用相同限制酶从DNA上切下.用DNA连接酶连接时,得到的重组产物中的质粒和质粒的结合,指的是一个质粒上两个粘性末端的 用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物?额。。问错了。。再问一遍,就是他会产生三种连接产物,那其中的那种载体-载体 基因工程中,为什么切质粒和切目的基因要用同种限制酶?用同种限制酶说明质粒里面也有和目的基因一样的基因,那么直接从质粒里面提取目的基因不就行了?2楼的说到“限制酶识别的是碱基 质粒和目的基因能用同种限制酶切吗? 基因工程中切割质粒和目的基因必需用同种限制酶? 切割质粒和含目的基因的外源DNA必须用同一种限制酶,这句话对吗? 用相同的限制酶切割DNA分子和质粒后,用连接酶连接会有几种重组质粒形成?所谓重组质粒就是目的基因和质粒相连,我问的是有几种重组质粒形成。为什么老师说只有一种?为什么不是正向 目的基因和质粒为什么要用一种限制酶切割?限制酶和DNA连接酶作用的位点相同么? 在基因工程中是否用一种限制酶处理含目的基因的DNA,用另一种处理质粒DNA 基因工程用同种限制酶处理质粒跟目的基因,那它们两个碱基序列不就一样吗?(切出跟插入的目的基因)为...基因工程用同种限制酶处理质粒跟目的基因,那它们两个碱基序列不就一样吗?(切 不属于目的基因与载体结合过程的是不属于目的基因与载体结合过程的是A用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端B用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端C将重组DNA导入受体细胞中进行扩增D 生物基因工程中用限制酶切割目的基因和运载体如果用同一种限制酶切割目的基因和运载体,再用DNA连接酶连接目的基因和载体,显而易见,可能会出现载体和载体连接,目的基因和目的基因连接 基因工程目的基因的顺序比如一段目的基因两侧有相同的两个酶切点 切下之后形成A和B两个粘性末端,与用同种限制酶且过的质粒结合(质粒两端分别为C、D),基因和质粒结合的方式有几种?(A 转基因中 限制酶去向?用限制酶取下目的基因和切开质粒后,剩余限制酶怎么处理,如果有残余的话不会对细胞DNA产生影响吗? 限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的?就是只有一种切割酶的时候,切完了以后目的基因和质粒是怎么连的?这个问题我不太懂.可能说的不是很清楚.额.就是类似于 农杆菌转化法中运用植物组织培育技术吗附.农杆菌转化法 1、获取目的基因.用限制酶切割下目的基因. 2、基因表达载体的构建.将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起