电泳胶板怎么做

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/09 07:52:19

电泳胶板怎么做
电泳胶板怎么做

电泳胶板怎么做
根据分离要求确定是琼脂糖还是聚丙烯酰胺,根据分离分子的分子量确定浓度；
加水加热融化,装好梳齿,合适温度加入显色剂（或者跑完电泳染色）,倒胶板.
以下为琼脂糖凝胶电泳的操作：
1 选择合适的水平式电泳槽,调节电泳槽平面至水平.检查稳压电源与正负极的线路；
2 选择孔径大小合适的点样梳子,垂直架在电泳胶模的一端,使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm；
3 按待分离DNA,配制相应浓度琼脂糖,100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀；
4 用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好,防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透.待琼脂糖凝胶冷却至50℃左右时,加入6μl核酸染料,摇匀,轻轻倒入电泳胶模中,琼脂糖凝胶的厚度在3～5mm.倒胶时要避免产生气泡,若有气泡可用吸管小心吸去；
5 琼脂糖凝胶凝固后,在室温放置20min,小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板,保持点样孔的完好；
6 将电泳胶模放入电泳槽中,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1～2mm.如点样孔内有气泡,用吸管小心吸出,以免影响加样；
7 将10μl DNA样品与2μl体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合.上样缓冲液不仅可以提高样品的密度,使样品均匀沉到样品孔内,还可以使样品带颜色,便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置；
8 用微量移液器将样品小心加入加样孔内,记录样品点样秩序；
9 盖上电泳槽,开启电源开关,最高电压不超过5V/cm（100～150V恒压电泳）,使DNA从负极向正极移动；
10 电泳时间随实验的具体要求而异.电泳一般需1～3小时.电泳完毕后关闭电源,戴一次性塑料手套取出凝胶,尽可能将所有的电泳缓冲液淋干,在254nm波长的透射紫外灯下观察.

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