怎么研究基因启动子上游的一段序列是不是基因表达的调控序列

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/09 15:40:09

怎么研究基因启动子上游的一段序列是不是基因表达的调控序列
怎么研究基因启动子上游的一段序列是不是基因表达的调控序列

怎么研究基因启动子上游的一段序列是不是基因表达的调控序列
可以将序列克隆到体外进行表达,通过基因表达的量来进行判断：
1.首先将上游序列带启动子序列克隆到一些报告基因的载体中,例如luciferase的基因,首先观察构建后,luciferase是否能够表达.然后再通过突变或截短启动子上游的区域,来观察luciferase的表达强弱,以判断是哪一段,甚至是哪几个碱基对下游基因的转录起到调控的作用.用报告基因是比较简单方便的办法.
2.如果目标基因的产物本身容易检测,也可以直接将上游序列到目标基因全部克隆出来,在体外进行表达.方法同样,是通过突变和缺失来验证功能.
如果缺失或突变该段序列后,目标基因无法表达,则说明是相关,如果经过验证后,表达水平没有变化,则说明是无关的序列.
通常,报告基因检测会简单些,因为直接加入底物或者是荧光激发,就可以知道表达水平的变化.在目标基因的验证上,通常会通过RT-qPCR查看mRNA水平,WB查看蛋白水平的变化来确认这段序列的功能.

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