噬菌体滴度的测定的方法具体操作步骤是什么?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/13 06:26:24

噬菌体滴度的测定的方法具体操作步骤是什么?
噬菌体滴度的测定的方法具体操作步骤是什么?

噬菌体滴度的测定的方法具体操作步骤是什么?
操作步骤 1. 在5~10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆,振摇孵育直至对数生长中期(OD600~0.5) 2. 在细胞生长时,微波融化顶层琼脂糖凝胶,分装至无菌培养管内,每管3ml.维持在45℃备用. 3. 37℃预热LB/IPTG/Xgal培养板,备用. 4. 以LB培养基10倍比稀释噬菌体. 建议稀释范围：对扩增的噬菌体培养上清,108-1011;对未扩增的筛选洗脱液,101-104.每次稀释都换用新的加样枪头,最好使用气溶胶阻隔枪头以避免交叉污染. 5. 一旦ER2537培养物长至对数生长中期,分装至微量离心管中,每管200ml. 6. 将倍比稀释的噬菌体上清加入含细菌培养物的微量离心管中,一支微量离心管中仅加入一种稀释液10ml,快速涡旋,室温孵育1-5min. 7. 转移至含有45℃顶层琼脂糖凝胶的管中,快速涡旋混匀,立即倾倒至预热的LB/IPTG/Xgal平板上,轻缓摇动平板使顶层胶均匀分布. 8. 冷却平板5min,37℃倒置培养过夜. 9. 噬斑计数以噬斑数为100左右的平皿为准,噬斑数乘以稀释度即可获得每10ml噬菌体的滴度-噬斑形成单位(pfu). 生物帮上面有详细的步骤, http://www.bio1000.com/experiment/microbiology/ 微生物学实验技术,医学微生物学实验技术,微生物学检验,现代微生物学及实验实训技术,微生物学实验思考题.
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