我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗?

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/06 00:16:01

我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗?
我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗?

我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗?
一般最少要四个啊.楼主当时怎么就只加了一个呢?浪费了一条引物.
楼主最好不要抱着侥幸心理试验能不能切开了,因为NotI酶很贵的,与其试验能不能切开不如直接再去合成引物了.
另外PMD-18这么难用的载体还真的有人在用?

你的表述我有点不明白，你是指目的基因PCR后连接到18T，然后再切出来连接到其它载体吗？是的，因为表达载体不同，所以需要的酶切位点也不同，但是克隆载体都是PMD-18T。哦，所谓保护碱基是指酶切的时候位点不能是光的，两边得有东西，你既然已经连到18T载体里面了，那两边都是有东西了的，就已经不存在保护碱基的问题了，我做克隆的时候，要进18T的话，只象征性的加一个碱基，以防末端发生某些未知的意外。...

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你的表述我有点不明白，你是指目的基因PCR后连接到18T，然后再切出来连接到其它载体吗？

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个人认为，如果是PCR之后将产物与T载体连接，然后再做酶切的话，引物加几个碱基影响并不大，因为保护碱基起到一个提供内切酶结合位点的作用，如果与T载体连接后，那么这个结合位点就不需要再人为添加了，而如果是PCR之后直接酶切的话，就需要保护碱基，这只是个人见解，有误勿怪...

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个人认为，如果是PCR之后将产物与T载体连接，然后再做酶切的话，引物加几个碱基影响并不大，因为保护碱基起到一个提供内切酶结合位点的作用，如果与T载体连接后，那么这个结合位点就不需要再人为添加了，而如果是PCR之后直接酶切的话，就需要保护碱基，这只是个人见解，有误勿怪

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NotI需要至少6个碱基的末端冗余才能有效完成酶切，我一般用的是GTTGTT，酶切一直都没有问题的。

我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗? 双酶切鉴定（或者测序）是否含有目的基因的时候,为何用pMD18-T载体?过程主要是：从小麦胚胚芽鞘中提出总的RNA,反转录cDNA,然后纯化cDNA,特异性PCR扩增,电泳,得到目的基因,然后连接载体pMD18-T TA克隆全是阴性我把1400bp的片段连接到宝生物的PMD18-T载体上,转化后,全是白斑,但是挑了二十个全是空载体, 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 从克隆载体上PCR出目的基因原理用TaKaRa的pMD18-T Vector可以16°C连接过夜吗(我的目的片段在600~700bp之间)? 关于T-A克隆的一些问题我做完了T-A克隆,提取质粒以后,用我的目的基因引物做PCR,跑电泳跑出来了目的条带,但是有一些杂带,是怎么回事呢. DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量已知一基因两侧序列,如何将该基因克隆你没明白我的意思，是要从如何获得目的基因上来回答；比如，知道一段蛋白质的mRNA序列，就用RT-PCR制备出cDNA，从而克隆。现在是知道两侧序列…… pMD18-T vector是什么?pUC18又是什么?是有关克隆载体构建方面的!能不能具体点？包括它们之间的区别？从植物中克隆出的基因能否转回到该植物中进行功能验证?我从某植物中已经成功克隆出了目的基因（是代谢途径中的关键酶基因）,我想验证这个酶基因的功能,我能不能把这个基因转回到该 TAKARA的PMD18-T载体可以用哪个通用引物验证?用了TAKARA的PMD18-T载体转入了目的片段,想用PCR验证下,该用什么引物验证 pMD18-T上有Xho I 酶切位点吗? TA克隆构建IL24基因重组质粒目的基因是从哪里获取的?构建重组质粒的方法是什么呢用pmd-18t载体克隆基因,能用M13测序吗要克隆基因,用的是TAKARA的PMD-18T载体,可以用M13测序吗?克隆基因最后这几步具体怎么做, 目的基因先克隆入克隆载体再亚克隆入表达载体与直接将目的基因克隆到表达载体上有什么好处? 含有目的基因的克隆载体打入生物体内,是如何表达蛋白的呢? 怎样克隆一个目的基因?