质粒转入细胞后使用抗生素G418怎样检测到阳性克隆

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/10 07:26:41

质粒转入细胞后使用抗生素G418怎样检测到阳性克隆
质粒转入细胞后使用抗生素G418怎样检测到阳性克隆

质粒转入细胞后使用抗生素G418怎样检测到阳性克隆
G418通过干扰核糖体的功能而阻断细胞的蛋白合成,阳性克隆中因含有抗性基因可以存活.
由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质,所以筛选不能太早
一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选.随着细胞的代谢G418的浓度和活性都会下降,所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200ug/ml
加药后,在高倍镜下,阳性克隆和阴性克隆很容易辨认,在阳性克隆下用记号笔做个标记.然后刮除阴性克隆,消化阳性克隆后继续筛选培养,最后再用有限稀释法把阳性克隆在96孔板中筛选
一般经过4周左右的筛选,得到的阳性克隆才都比较稳定

向转染后的细胞中加入一定浓度的G418,一段时间后,不死,存活下来的就是阳性克隆。

质粒转入细胞后使用抗生素G418怎样检测到阳性克隆 目的片段转入表达载体后我用什么方法可以检测我的目的质粒? 是这样的.书上说将目的基因转入质粒的时候,要进行筛选.此时质粒带有标记基因,那此时的检测方法是什么?那将这个质粒转入农杆菌中,在检测的方法是什么?将农杆菌转入植物细胞中,检测方 下列哪一种方法不能用于检测目的基因是否成功导入或表达?A.将目的基因直接进行放射性标记,导入受体细胞后用检测仪跟踪.B.在含某种抗生素的培养基中培养导入了重组质粒的大肠杆菌.C.利 为什么可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒 PF用带目标基因的质粒(pEGFP-N1)转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达株10天,GFP表达减弱减少.目的基因和GFP构成融合蛋白,转染后24小时,空载表达GFP70%,但目的基因表达GFP很弱很少,经筛选后,连空载 G418原代细胞如何筛选? 筛选含目的基因的受体细胞时,质粒上必须携带抗生素抗性基因吗 举一个例子:大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因,当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体是否吸饱具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得 重组质粒已成功转入大肠杆菌内,-20°冻存,怎样复活,扩大培养? pcdna3.1作为载体的重组质粒转入大肠杆菌怎么检测筛选酶切了hindⅢ和EcoRⅠ, 将大肠杆菌的质粒转入动物细胞,其抗性基因是否就在宿主中表现出来 质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞再热激以后进行活化培养,这时培养基为什么不加入抗生素 质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞再热激以后进行活化培养,这时培养基为什么不加入抗生素 转入大肠杆菌质粒还可以提取转入农杆菌?为什么? 质粒提取后不干燥能电泳检测吗? 转入质粒后种植在LB平板上的大肠杆菌怎样在-70--80度时保存,最好是用甘油.偶是新手,刚做实验,谢啦. 基因工程中载体上抗生素抗性基因作用如果取出大肠杆菌质粒,插入目的基因,再导入大肠杆菌.抗生素抗性基因如何帮助检测成功于否?加入抗生素的话,不懂,导入与否都不死啊,不可能把所